探讨人结直肠癌组织中表皮生长因子受体1(EGFR)与Fascin-1蛋白表达的关系及其临床意义。
回顾性收集2008年1月—2010年12月东阳市人民医院病理科结直肠癌石蜡标本258例和同时切除的正常结直肠组织石蜡标本72例。采用免疫组织化学EnVision法检测并比较直肠癌组织和正常结直肠组织中EGFR和Fascin-1蛋白的表达；分析结直肠癌中Fascin-1蛋白表达与结直肠癌患者临床病理特征、EGFR的关系，以及EGFR和Fascin-1蛋白的表达与患者的预后生存情况的关系。
(1)结直肠癌组织中Fascin-1蛋白的阳性率为38.0%(98/258)，高于正常结直肠组织的阳性率0.0%(0/72)，差异有统计学意义(χ2＝38.901，P<0.01)。(2)女性、结肠及低分化的结直肠癌患者中Fascin-1蛋白的阳性率高于男性、直肠及高-中分化患者(χ2＝4.256、20.085、8.471，P值均<0.05)。(3)在EGFR阳性结直肠癌患者的Fascin-1蛋白阳性表达率(42.9%，91/212)较EGFR阴性病例(15.2%，7/46)高，差异有统计学意义(χ2＝12.318, P<0.01)；Spearman相关分析显示，结直肠癌组织中EGFR和Fascin-1蛋白表达呈正相关(rs＝0.219，P<0.01)。(4)194例获得随访的结直肠癌患者5年总生存率为73.2%(142/194)，5年无复发生存率为65.5%(127/194)。其中EGFR和Fascin-1均阳性患者的5年平均总生存期及5年总生存率(47.8个月、64.7%)低于非均阳性患者(54.4个月、77.8%)，差异有统计学意义(χ2＝5.039, P<0.05)。
结直肠癌中EGFR与Fascin-1蛋白的表达呈正相关，二者同时表达与患者预后不良有关。
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结直肠癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病人数和病死人数均处于恶性肿瘤前列[1,2]。表皮生长因子受体1(epidermal growth factor receptor 1, EGFR)是促肿瘤发生发展的重要因子，其在结直肠癌发生及进展过程中发挥了重要作用[3,4]。Fascin-1蛋白是一种相对分子量5.5×104的细胞骨架蛋白，其高表达与乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌等多种肿瘤发生、进展密切相关[5,6,7,8]。笔者先前的研究显示人乳腺癌组织中EGFR信号通路可上调Fascin-1蛋白表达，进而影响癌细胞侵袭[9,10]。然而，关于结直肠癌中EGFR和Fascin-1蛋白的相关性及临床意义，目前尚未见相关研究。因此，在本研究中，采用免疫组织化学法检测258例结直肠癌组织的EGFR及Fascin-1蛋白表达，并以同时切除的72例正常结直肠组织石蜡标本为对照，旨在探讨人结直肠癌组织中EGFR与Fascin-1蛋白表达的关系及其临床意义。
纳入标准：(1)经手术切除且病理诊断为结直肠癌患者的肿瘤标本；(2)临床病理资料完整；(3)正常结直肠组织切取自本组手术患者，距离肿块边缘>5 cm。排除标准：术前经化疗、免疫及放射等抗肿瘤治疗。
采用回顾性研究。收集2008年1月—2010年12月东阳市人民医院病理科结直肠癌石蜡标本258例、正常结直肠组织石蜡标本72例。男155例，女103例；年龄24～93岁，中位年龄69岁；右半结肠癌63例，左半结肠癌55例，直肠癌140例；高分化35例，中分化195例，低分化28例；TNM分期[11]Ⅰ期32例，Ⅱ期109例，Ⅲ期102例，Ⅳ期15例。在本组结直肠癌病例中，194例有完整的随访资料者纳入本研究生存分析。本研究经东阳市人民医院医学伦理委员会批准(东人医2018-YX-105)。
以10%甲醛固定组织，石蜡包埋，4 μm连续切片。EnVision二步法免疫组织化学染色简要流程：柠檬酸盐缓冲液高压热修复2 min，0.3% H2O2室温孵育10～15 min，兔抗人EGFR多克隆一抗(克隆号：1005，美国Santa Cruz公司)及鼠抗人Fascin-1单克隆一抗(克隆号：55K-2，美国Santa Cruz公司)均以1∶100比例稀释滴加，室温孵育70 min，然后用二抗(Dako公司)室温孵育40 min，最后用DAB显色剂显色5 min，苏木素复染、脱水、透明、封片。
观察指标：(1)Fascin-1蛋白在结直肠组织中的表达情况及其与结直肠癌患者临床病理特征(性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期)的关系。(2)结直肠癌患者EGFR的表达情况及与Fascin-1蛋白表达的相关性。(3)患者的预后生存情况及与EGFR和Fascin-1蛋白表达的关系。无复发生存期、总生存期。
EGFR染色主要定位于细胞膜和细胞浆，以≥10%癌细胞可见弱或强的胞膜着色为阳性[9,10]。Fascin-1蛋白染色主要定位于细胞胞浆，肿瘤间质纤维、血管内皮细胞均见阳性表达。结果判定标准：肿瘤细胞染色强度计分，0(无染色)、1(淡黄色)、2(棕黄色)、3(棕褐色)；肿瘤细胞染色范围计分，0(无阳性细胞)、1(1%～25%)、2(26%～50%)、3(51%～75%)、4(76%～100%)，两者相加得分0～7分。以得分≥3分且切片中≥5%肿瘤细胞染色视为阳性[9,10]。结果判读由两位病理医师独立完成。
患者术后均每半年复查1次。通过临床或组织学诊断结直肠癌局部复发。若患者死亡随访终止。
应用SPSS 19.0统计软件对数据进行分析。计数资料采用χ2检验。结直肠癌EGFR和Fascin-1蛋白表达的相关性采用Spearman相关分析。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，生存分析用Log-rank检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
72例正常结直肠组织均未见Fascin-1蛋白阳性表达(0.0%)，而258例结直肠癌中，98例Fascin-1蛋白阳性表达(38.0%)，结直肠癌中Fascin-1蛋白阳性率显著高于正常结直肠组织(χ2＝38.901, P<0.01)。
结直肠癌中Fascin-1蛋白阳性率在女性、结肠部位及组织学低分化者中高于男性、直肠部位及组织学高-中分化者，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。见表1、图1。
258例结直肠癌患者不同临床病理特征Fascin-1蛋白表达的比较[例(%)]
258例结直肠癌患者不同临床病理特征Fascin-1蛋白表达的比较[例(%)]
| 临床病理特征 | Fascin-1阴性 | Fascin-1阳性 | χ2值 | P值 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 例数 | 160 | 98 | |||
| 性别 | |||||
| 男 | 104(67.1) | 51(32.9) | 4.256 | <0.05 | |
| 女 | 56(54.4) | 47(45.6) | |||
| 年龄(岁) | |||||
| <60 | 46(63.0) | 27(37.0) | 0.043 | >0.05 | |
| ≥60 | 114(61.6) | 71(38.4) | |||
| 肿瘤部位 | |||||
| 右半结肠 | 28(44.4) | 35(55.6) | 20.085 | <0.05 | |
| 左半结肠 | 28(50.9) | 27(49.1) | |||
| 直肠 | 104(74.3) | 36(25.7) | |||
| 分化程度 | |||||
| 高分化 | 26(74.3) | 9(25.7) | 8.471 | <0.05 | |
| 中分化 | 123(63.1) | 72(36.9) | |||
| 低分化 | 11(39.3) | 17(60.7) | |||
| 浸润深度 | |||||
| Tis＋T1 | 5(50.0) | 5(50.0) | 2.835 | >0.05 | |
| T2 | 27(73.0) | 10(27.0) | |||
| T3 | 53(62.4) | 32(37.6) | |||
| T4 | 75(59.5) | 51(40.5) | |||
| 淋巴结转移 | |||||
| N0 | 92(63.9) | 52(36.1) | 0.534 | >0.05 | |
| N1 | 40(58.8) | 28(41.2) | |||
| N2 | 28(60.9) | 18(39.1) | |||
| 远处转移 | |||||
| M0 | 151(62.1) | 92(37.9) | 0.027 | >0.05 | |
| M1 | 9(60.0) | 6(40.0) | |||
| TNM分期 | |||||
| Ⅰ | 21(65.6) | 11(34.4) | 0.491 | >0.05 | |
| Ⅱ | 69(63.3) | 40(36.7) | |||
| Ⅲ | 61(59.8) | 41(40.2) | |||
| Ⅳ | 9(60.0) | 6(40.0) | |||
258例结直肠癌中，EGFR阳性表达212例(82.2%)，Fascin-1蛋白阳性表达98例(38.0%)。在EGFR阳性的结直肠癌患者中，Fascin-1蛋白阳性表达率(42.9%，91/212)较其在EGFR阴性患者中的表达(15.2%，7/46)高，差异有统计学意义(χ2＝12.318, P<0.01)，Spearman相关分析显示结直肠癌中EGFR和Fascin-1蛋白表达呈正相关(rs＝0.219, P<0.01)。见图2。
患者术后平均随访时间为60(3～80)个月。生存分析显示，在194例获得随访信息的结直肠癌患者中，5年总生存率为73.2%(142/194)，5年无复发生存率为65.5%(127/194)。
5年总生存率比较：EGFR阳性患者低于EGFR阴性患者，Fascin-1蛋白阳性患者低于Fascin-1蛋白阴性的患者，但差异均无统计学意义(χ2＝1.765、3.031, P值均>0.05)，见图3A、图3B；然而，EGFR和Fascin-1蛋白均阳性患者的5年平均生存期为47.8个月、5年总生存率为64.7%，显著低于EGFR和Fascin-1蛋白非均阳性患者5年平均生存期54.4个月、5年总生存率77.8%，差异有统计学意义(χ2＝5.039、P<0.05)，见图3C。
注：EGFR为表皮生长因子受体1
5年无复发生存率比较：EGFR阳性的患者低于EGFR阴性的患者，Fascin-1蛋白阳性的患者低于Fascin-1蛋白阴性的患者，但差异但均无统计学意义(χ2＝2.167、0.698, P值均>0.05)，图3D、图3E。EGFR和Fascin-1蛋白均阳性患者的5年平均无复发生存期为43.6月、5年无复发生存率为60.3%，而EGFR和Fascin-1蛋白非均阳性患者分别为49.2月和68.3%，差异无统计学意义(χ2＝1.978, P>0.05)，见图3F。
Fascin-1参与形成细胞膜丝状伪足、片状伪足、微棘，并促进细胞运动、迁移[12]。已有研究表明，Fascin-1蛋白在乳腺癌、胃癌、非小细胞肺癌等多种肿瘤中表达上调，并与癌细胞侵袭转移密切相关[5,6,7,8]。针对结直肠癌的多项研究均显示，Fascin-1蛋白表达较正常结直肠组织显著上调，然而关于结直肠癌中Fascin-1蛋白表达情况在这几项研究中有较大差异[13,14,15,16]。本研究结果显示，结直肠癌组织中Fascin-1蛋白阳性率为38.0%,而正常结直肠组织不表达Fascin-1，另外在低分化癌中Fascin-1蛋白表达率显著高于高-中分化，表明Fascin-1在结直肠癌发生发展中发挥了重要作用。
EGFR是表皮生长因子受体家族(HER/erbB家族)的重要成员，它是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白受体。EGFR通过下游PI3K-AKT或RAF-MEK-ERK1/2等信号转导通路调节细胞增殖、凋亡和分化等功能[17]。EGFR在多种肿瘤中存在高表达或异常活化，是促肿瘤发生发展的重要因子，在结直肠癌发生及进展过程中发挥了重要作用，是抗结直肠癌治疗的一个重要的分子靶点[3,4]。
笔者先前的研究显示，乳腺癌中EGFR和Fascin-1蛋白表达正相关，且在三阴性乳腺癌中EGFR可通过丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)通路上调Fascin-1表达，进而影响癌细胞侵袭[9,10]。在本研究中，通过对结直肠癌较大样本中EGFR和Fascin-1表达的免疫组织化学技术检测，发现EGFR表达阳性的结直肠癌中，Fascin-1蛋白阳性率显著高于EGFR阴性病例，EGFR和Fascin-1蛋白表达呈正相关。笔者认为，结直肠癌中EGFR过表达可能通过下游信号通路，正性调控Fascin-1基因转录，从而上调Fascin-1蛋白表达，影响肿瘤发生发展。进一步生存分析显示，EGFR和Fascin-1蛋白均阳性的结直肠癌患者5年总生存率显著低于其他患者，而EGFR或Fascin-1蛋白单一阳性者5年总生存率虽比阴性者低，但差异无统计学意义。综上，笔者认为，结直肠癌中EGFR信号通路可能通过正性调控Fascin-1表达进而影响患者预后，EGFR和Fascin-1蛋白具有协同促肿瘤作用。那么，EGFR是通过什么途径和方式来调控Fascin-1表达的，以及该通路在抗结直肠癌治疗中的作用，将是后续研究的重点。
目前，以EGFR为靶点的靶向治疗药物西妥昔单抗和帕尼单抗已被批准用于治疗晚期转移性结直肠癌患者，然而，两者治疗的有效率均较低，仅约10%的患者获得了疾病缓解[18,19,20]。EGFR及其信号通路下游基因突变等原因，是导致EGFR靶向治疗失败和耐药的主要原因。故寻求EGFR下游信号通路中与其存在协同或替代作用的治疗靶点进行多靶点联合治疗，对提高结直肠癌治疗效果具有重要意义。因此，本研究的发现可能为抗结直肠癌治疗提供新的靶点和理论依据。
利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突
